Forschungsprojekt: Studie zur Etablierung einer sicheren diagnostischen Methodik für das Koi-Herpes-Virus für alle Untersuchungsstellen in Bayern und zur Untersuchung der Verbreitung des Virus in Bayern
Kurzbeschreibung
Durch die Aufbereitung von 1g Gewebe (Kiemen oder Nieren) anstatt 25mg mit dem DNeasyBlood&Tissue Kit® (Qiagen), nach der hier beschriebenen Methode konnte die Nachweisbarkeit von KHV mit der real-time PCR nach Gilad et al.(2004) in Feldproben um bis zu 7 ct-Werte verbessert werden. Die Streuung der Werte der einzelnen Probenstücke konnte ebenfalls verbessert werden. Insbesondere wenn man Organe von mehreren Fischen aus Kostengründen für die Untersuchung poolen muss, wird die Gefahr, dass ungleich verteilte Virusmengen nicht nachgewiesen werden reduziert. Durch die hohe Gewebemenge trat kene beeinträchtigung der Extraktion mit dem DNeasyBlood&Tissue Kit® (Qiagen) ein, was möglicherweise auf das Abzentrifugieren der Gewebeteile nach der Homogenisierung und vor dem Proteinase K-Verdau zurückzuführen ist.
Die Fixierung der Gewebeproben in 100% Isopropanol ist ein gutes Mittel, um Proben ohne aufwendige Kühlung oder Frostung zu lagern und zu versenden. Isopropanol stört den Nachweis von KHV nicht und muss auch nicht vorder Probenextraktion durch Trocknung oder ‚Wässern entfernt werden.
Die Nachweisbarkeit von KHV in der real-time-PCR nach Gilad et al.(2004) konnte durch die Verwendung des Brilliant II QPCR Master Mix® (Stratagene) noch um bis zu 2ct-Werte verbessert werden.
Laufzeit: 2008