Forschungsprojekt:Validierungsuntersuchungen für Teste zur BVDV Ohrgewebeanalytik
Kurzbeschreibung
Hintergrund
In der „Studie zur Eignung der Ohrstanzmethode bei neugeborenen Kälber zur Bekämpfung der BVD/MD (Bovine Virusdiarrhoe/Mucosal Disease)“ wurden ein Erns Antigen ELISA (Idexx) sowie eine PCR-Methode für den Virusnachweis bei über 12000 Tieren aus dem Feld eingesetzt, deren tatsächlicher BVDV-Status durch Goldstandard-Methoden bestätigt wurde. Bedingt durch den Einfluss kolostraler Antikörper erreichte der ELISA eine Sensitivität von ca. 97% zur Findung von PI-Tieren.
Die PCR hat sich im Rahmen der Studie durch eine 100%ige Sensitivität (N= 222 PI-Kälber) ausgezeichnet. Dabei wurde eine mechanische und enzymatische Gewebebearbeitung vorgenommen und anschließend ein PCR-Protokoll des FLI-Referenzlabors durchgeführt. Inzwischen sind eine Reihe kommerzieller PCR-Produkte auf den Markt gekommen. Diese arbeiten teilweise mit einem stark vereinfachten Lysesystem zur RNA-Freisetzung. Bisher wurden nur wenige Vergleichsuntersuchungen anhand von standardisierten Probenmaterialien durchgeführt. Die dabei gewonnenen Ergebnisse weisen darauf hin, dass die Sensitivität der PCR-Untersuchungen von der Art der Gewebelyse stark beeinflusst wird. Im Hinblick auf die Notwendigkeit von Massenuntersuchungen ab 2011 wäre eine Vereinfachung der Probenbearbeitung wünschenswert. Daher ist eine Überprüfung der aktuell verfügbaren Tests geboten.
Zur Qualitätssicherung für BVDV-Diagnostiklabore mit hohem Durchsatz sind in das System eingespeiste Kontrollproben wünschenswert bzw. gefordert. Hierzu sind derzeit keine Standards definiert. Im Rahmen des Projekts werden synergistisch zum Methodenvergleich entsprechende Definitionen erstellt. Ein Vorschlag für die Mindestanforderung zur Untersuchung von Ohrgewebeproben für die Befund-Gültigkeit im Rahmen der Umsetzung der BVDV-Verordnung in Bayern sollte erarbeitet werden.
Ziele
- Vergleichende Untersuchung von Gewebebearbeitungs- und PCR-Protokollen für die BVDV Ohrgewebeanalytik
- Definition der Anforderung an Kontrollproben, die im Rahmen der landesweiten Eradikation verwendet werden können (Virusantigen und Nukleinsäuremengen, Streuung, Belastung mit kolostralen Antikörpern, Eignung für unterschiedliche Gewebe-Ohrmarkenformate)
- Definition der Mindestanforderung zur Untersuchung von Ohrgewebeproben für die Befund-Gültigkeit im Rahmen der Umsetzung der BVDV-Verordnung in Bayern
Laufzeit: 2009